Comment fonctionne la trypsine dans la culture cellulaire
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La trypsine est une sérine protéase qui clive les résidus de lysine et d’arginine au niveau de l’extrémité C-terminale des peptides.. C’est l’enzyme la plus largement utilisée dans la culture cellulaire pour libérer les cellules adhérentes des surfaces des récipients de culture.. La trypsine est facilement tolérée par la plupart des types de cellules cultivées en culture. Son activité peut être facilement neutralisée par l'ajout de sérum dans le milieu de culture. Ces deux caractéristiques de la trypsine facilitent leur utilisation dans les cultures cellulaires. Généralement, la trypsine est ajoutée aux cultures cellulaires avec l'EDTA. Le rôle de la trypsine dans les cultures cellulaires est décrit dans cet article..
Zones clés couvertes
1. Quelle est la trypsine
- Définition, caractéristiques, fonction
2. Comment fonctionne la trypsine dans la culture cellulaire
- Rôle de la trypsine dans la culture cellulaire
Mots-clés: protéines adhésives, adhésion cellulaire, enzyme digestive, trypsine, trypsinisation
Quelle est la trypsine
La trypsine est une enzyme digestive qui décompose les protéines dans le système digestif de nombreux vertébrés. On le trouve dans le suc pancréatique. La trypsine coupe les résidus de lysine et d'arginine du carboxy-terminal des peptides. Cependant, il ne les clive pas lorsque ces deux acides aminés sont suivis de praline. L’activité de la trypsine est utilisée dans de nombreux processus biotechnologiques et l’action de la trypsine est appelée trypsinisation ou protéolyse de la trypsine. La structure cristalline de la trypsine est montrée dans Figure 1.
Figure 1: trypsine
Le pH optimal pour l'action de la trypsine est compris entre 7,6 et 8,5. En règle générale, le rouge phénol est utilisé dans les dosages à la trypsine pour surveiller la plage de pH ci-dessus. Le rouge de phénol donne une couleur rosâtre à cette plage de pH. Les dosages à la trypsine sont effectués sur de la neige carbonique.
Comment fonctionne la trypsine dans la culture cellulaire
Les protéines présentes sur la membrane plasmique sont responsables de nombreuses fonctions essentielles au maintien de l'activité physiologique normale de la cellule. Certaines protéines de la membrane plasmique, telles que les familles de cadhérines, sont des protéines adhésives servant d’ancres, reliant les protéines du cytosquelette à la matrice extracellulaire. Cela facilite l'adhésion cellulaire et la migration cellulaire. Les protéines adhésives dans la membrane plasmique sont montrées dans Figure 2.
Figure 2: Protéines adhésives cellulaires
Dans les cultures cellulaires, la trypsine peut être ajoutée au milieu pour libérer les cellules adhérentes de la surface du vaisseau de culture en digérant les protéines adhésives. La trypsine libère également les cellules des agrégats par la digestion des protéines adhésives. L'EDTA est également ajouté aux cultures cellulaires avec la trypsine pour chélater les ions divalents dans le milieu. Les ions calcium et magnésium peuvent inhiber l'action de la trypsine. En fin de compte, la trypsine aide à obtenir des cellules individuelles à partir des cultures cellulaires, facilitant ainsi le traitement en aval des cellules..
Conclusion
La trypsine est une enzyme photolytique qui digère les peptides. La trypsine est largement utilisée en culture cellulaire afin d'obtenir des cellules individuelles, car la trypsine digère les protéines adhésives et les libère dans le milieu..
Référence:
1. «Altération du protéome induite par la trypsine au cours de la sous-culture cellulaire dans des cellules de mammifères». Journal des sciences biomédicales, BioMed Central, 11 mai 2010, disponible ici.
Courtoisie d'image:
1. “1UTN” Par utilisateur: DrKjaergaard - Travail personnel: à partir du fichier PDB 1UTN. Créé avec PyMol (domaine public) via Commons Wikimedia
2. “Cell Adhesion” De ZabMilenko sur Wikipedia anglais - Transféré de en.wikipedia à Commons par Premeditated Chaos utilisant CommonsHelper (Domaine public) via Commons Wikimedia
