Différence entre les tests ELISA direct et indirect

Différence clé - ELISA direct vs indirect
 

Un test immunoenzymatique (ELISA), également appelé dosage immunoenzymatique, est un test sérologique permettant de détecter les anticorps dans le sang.. Il est utilisé comme outil de diagnostic pour déterminer si le patient a été exposé à un type particulier de virus ou à un autre agent infectieux (antigène) et si le corps a produit des anticorps contre l’infection. ELISA peut également identifier les infections passées et actuelles. Par conséquent, le test ELISA est souvent utilisé comme test de présélection par les médecins avant l’analyse approfondie des maladies. Ce test peut être effectué en laboratoire en prélevant un échantillon de sang du patient. Il existe deux types de tests ELISA: les tests ELISA directs et indirects. La principale différence entre les tests ELISA direct et indirect est que ELISA indirect est plus sensible et nécessite l'ajout d'un anticorps secondaire tandis que ELISA direct est moins sensible et utilise uniquement un anticorps primaire.

CONTENU
1. Vue d'ensemble et différence clé
2. Qu'est-ce que Direct ELISA?
3. Qu'est-ce que l'ELISA indirect?
4. Comparaison côte à côte - ELISA direct et indirect
5. Résumé

Qu'est-ce que Direct ELISA??

ELISA est un test diagnostique de la maladie réalisé pour identifier la présence d'antigènes ou d'anticorps particuliers dans le sang. C'est fait comme un test sur plaque. Il utilise des anticorps liés à des enzymes faciles à doser. La présence d'antigènes dans l'échantillon de sérum se lie à des anticorps spécifiques liés à des enzymes. Dans la dernière étape, un substrat spécifique est ajouté pour réagir avec l'enzyme. L'enzyme convertit le substrat en un produit coloré ou produisant un signal. Le changement de couleur du substrat chimique révèle la présence d'un anticorps particulier dans l'échantillon de sérum. Le test ELISA direct utilise uniquement un anticorps primaire lié à l’enzyme. Lors de la liaison à l'antigène, la couleur change rapidement, indiquant la présence de l'agent infectieux dans le sang. Cependant, l'intensité des signaux est plus faible en ELISA direct car les épitopes sont limités à la liaison des antigènes. Par conséquent, l'ELISA direct est moins sensible que l'ELISA indirect.

Figure 01: Test ELISA direct

Qu'est-ce que l'ELISA indirect??

La méthode ELISA peut être réalisée en utilisant deux types d’anticorps, à savoir: anticorps primaire et anticorps secondaire. L'outil ELISA indirect utilise les deux types d'anticorps pour amplifier les signaux et permettre une meilleure détection. La technique ELISA indirecte est réalisée comme suit.

1. Les plaques sont incubées avec les antigènes et lavées pour bloquer la liaison non spécifique.
2. Ensuite, les anticorps primaires sont ajoutés et lavés.
3. Les anticorps secondaires liés aux enzymes sont ajoutés et lavés.
4. Un substrat est ajouté et laissé réagir avec les enzymes.
5. Les signaux sont détectés et la présence ou l'absence de l'antigène spécifique dans l'échantillon est identifiée.

Dans le test ELISA indirect, plusieurs anticorps secondaires peuvent se lier à un seul anticorps primaire. Les anticorps secondaires sont liés à des enzymes faciles à doser. Par conséquent, une liaison peut générer un signal fort en raison de plusieurs interactions. Par conséquent, l'ELISA indirect est plus sensible que l'ELISA direct. Cependant, le test ELISA indirect peut générer des signaux non spécifiques en raison de réactions croisées des anticorps secondaires.

Figure 02: Test ELISA indirect

Quelle est la différence entre les tests ELISA direct et indirect??

ELISA direct vs indirect
L'ELISA direct est moins sensible que l'ELISA indirect.	ELISA indirect est plus sensible.
Temps pris
Le test ELISA direct est un processus rapide.	ELISA indirect prend beaucoup de temps.
Utilisation d'anticorps
Un seul type d'anticorps (anticorps primaires) est utilisé en ELISA direct.	Les anticorps primaires et secondaires sont utilisés pour les tests ELISA indirects.
Lien avec les enzymes
Les anticorps primaires sont liés aux enzymes.	Les anticorps secondaires sont liés aux enzymes.
Réactivité croisée des seconds anticorps
ELISA direct élimine la réactivité croisée des seconds anticorps.	ELISA indirect est affecté par la réactivité croisée des seconds anticorps.
Des signaux
Les signaux sont faibles comparés aux tests ELISA indirects.	Les signaux sont amplifiés en ELISA indirect. Par conséquent, il est facile de détecter.

Résumé - ELISA direct vs indirect

ELISA est une technique biochimique utilisée principalement en immunologie pour détecter la présence d'un anticorps ou d'un antigène dans un échantillon de sang d'un patient. Il peut être effectué via deux processus appelés ELISA direct ou indirect. Le test ELISA direct utilise uniquement des anticorps primaires pour détecter l'antigène, tandis que le test ELISA indirect utilise des anticorps primaires et secondaires. Dans le test ELISA direct, les anticorps primaires sont marqués alors que dans le test ELISA indirect, les anticorps secondaires sont marqués. C'est la différence entre les tests ELISA direct et indirect.

Références
1. "Le dosage des immuno-absorbants enzymatiques (ELISA)". Bulletin de l'Organisation mondiale de la Santé. Bibliothèque nationale de médecine des États-Unis, 1976. Web. 29 mars 2017
2. Loon, A. M van, J. T. Van Der Logt, F. W. Heessen et J. Van Der Veen. «Essai d'immunosorbant lié à une enzyme utilisant un antigène marqué pour la détection des anticorps anti-immunoglobuline M et A dans la toxoplasmose: comparaison avec l'immunofluorescence indirecte et le dosage d'immunosorbant lié à une double sandwich», Journal of Clinical Microbiology. Bibliothèque nationale de médecine des États-Unis, juin 1983. Web. 29 mars 2017

Courtoisie d'image:
1. “Diagramme ELISA” de Cavitri - Travail personnel (CC BY 3.0) via Wikimedia Commons 
2. “ELISA indirect” Par Cawang - Propre travail (CC0) via Wikimedia Commons